【4.7.2】酵母双杂交技术(Y2H)

酵母双杂交技术是将待研究的两种蛋白质分别克隆（融合）到酵母表达质粒的转录激活因子的DNA结合结构域（DNA-BD）和转录激活域（AD）上，通过2 个结构域的结合，从而调控目的基因的转录过程。这两个结构域分开时仍分别具有功能，但不能激活转录，只有当被分开的两者通过适当的途径在空间上较为接近时，才能重新呈现完整的转录因子活性，并可激活上游激活序列（upstream activating sequence，UAS）的下游启动子，使启动子下游基因得到转录。

优点：

① 操作简单，方便快捷，实验成本较低；

② 可快速、大量筛选蛋白互作组；

③ 灵敏度高，可检测存在于微弱或暂时蛋白相互作用。

缺点：

① 自身转录蛋白往往会造成假阳性的结果；

② 蛋白过量表达时对酵母产生毒性，使得酵母无法正常生长；

③ 无法检测细胞核外的蛋白互作。

参考资料

• https://zhuanlan.zhihu.com/p/389627197