【3.4.5.1】可见分光光度计进行核酸热稳定性测量（Tm）
使用快速、准确的温控型紫外-可见分光光度计进行热解链 (Tm) 分析
紫外-可见分光光度计利用核酸在 260 nm 处有最大吸光度的特点，已经被广泛应用于核酸样品的定量和产品的质量控制中。使用 260 nm 处的吸光度和确定的吸收系数可以轻松计算核酸的浓度。通常还需进行背景校正，例如使用不含核酸基质的空白溶液来采集基线，或在核酸不吸收的波长处测定吸光度。
双链核酸由碱基对之间的氢键连接。双链核酸变性为单链的温度取决于：
- 核酸的序列和长度
- pH 值和缓冲液条件
- 两条链之间碱基对的任意错配
因此，解链温度是一种非常有用的分析工具，可以通过监测 260 nm 处的吸光度随着温度的升高或降低而产生的变化来进行研究。随着温度升高，链之间的氢键断裂，双链核酸解离成两条单链。当链解离时，260 nm 处的吸光度增加。此时吸光度的最大值与最小值的中点称为“解链温度”(Tm) 。
图1. DNA 样品的热解链曲线
其他分子/化合物的热解链曲线也可以使用紫外-可见光谱分析，包括聚合物的浊点测定、药物-蛋白质相互作用和蛋白质热变性。
参考资料
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